【卡梅德生物】蛋白表达-原核表达载体的元件及方式

原核表达载体的表达元件

①启动子:启动子在影响蛋白表达量上扮演重要角色,lac、 trp、tac、T7噬菌体启动子及IPL启动子是原核表达载体的主要启动子。 lac启动子被IPTG调控表达。lac杂合启动子被lac和trp组合而成,同样用IPTG来诱导,启动能力远超于lac和trp。色氨酸启动子trp被色氨酸诱导表达。T7噬菌体启动子具备有高度特异性,受控于T7 RNA聚合酶,T7 RNA聚合酶的活性远超过大肠杆菌聚合酶,因此可以高效表达目的基因。IPL启动子受温度的调控,活性大于trp。

②转录终止子为了保持载体系统稳定,防止被克隆的外源基因表达干扰。将转录终止子插入到多克隆位点的下游。

③核糖体结合位点mRNA转录完成后,为了能将目的蛋白完整翻译出来,需要借助宿主细胞的蛋白质合成系统。因此在插入的外源基因的mRNA上,必须存在宿主细胞核糖体的结合位点,从而起始密码子被启动翻译,蛋白质完成。

原核表达载体的表达方式

①组成型表达 组成型启动子包括T7噬菌体启动子等,当目的基因受该类启动子的控制时,外源目的基因选择表达。产量高,但对一些宿主细胞有害的蛋白不推荐用,这是是组成型表达的特点。

②诱导型表达 lac及杂合启动子tac为IPTG诱导型启动子。trp作为色氨酸诱导型启动子。IPL是温度调控启动子,无论受到何种因素调控,诱导型启动子的表达可避免宿主前期生长受到不利影响,同时可减少表达产物被蛋白酶所降解,适合于有毒蛋白的表达。

③融合型表达 表达载体的多克隆位点上存在多种融合表达标签,目的蛋白与标签共同表达为融合蛋白,有利于后续的蛋白分离纯化及检测。常见标签有GST标签SUMO标签及His标签。

④分泌型表达 在起始密码与目的基因之间加信号肽,使得目的蛋白穿过细胞膜,分泌于胞外。除此之外,分泌出的表达产物一般是可溶性的,不存在复性步骤。

选择合适的表达载体,对于成功的表达目的蛋白至关重要,我们应结合目的基因的特点,对于蛋白的下游应用等,综合评估哪种载体进行重组蛋白的表达和方案设计。

相关推荐
智能与未来20 小时前
10月22日鸿蒙6.0智能体系统正式发布,对标微软17日发布的Windows 11 Agentic OS!
业界资讯
陈思杰系统思考Jason2 天前
系统思考修炼之旅
百度·微信·微信公众平台·新浪微博·微信开放平台
小龙报3 天前
《赋能AI解锁Coze智能体搭建核心技能(2)--- 智能体开发基础》
人工智能·程序人生·面试·职场和发展·创业创新·学习方法·业界资讯
陈思杰系统思考Jason4 天前
时硕科技,隐形冠军的修炼之道
百度·微信·微信公众平台·新浪微博·微信开放平台
陈思杰系统思考Jason7 天前
心智结构与组织学习
百度·微信·微信公众平台·新浪微博·微信开放平台
CAD芯智库8 天前
国产三维CAD实现复杂实体快速转换钣金 | 中望3D 2026亮点速递(9)
科技·业界资讯·国产三维cad软件·中望3d2026·钣金3d设计
央链知播9 天前
重磅新书 | 《链改2.0:从数字资产到RWA》
金融·区块链·业界资讯
小龙报10 天前
《C语言疑难点 --- 字符函数和字符串函数专题(上)》
c语言·开发语言·c++·算法·学习方法·业界资讯·visual studio
陈思杰系统思考Jason13 天前
系统思考重塑工作效能
百度·微信·微信公众平台·新浪微博·微信开放平台
CAD芯智库13 天前
国产三维CAD工程图特征、公母唇缘有何提升?| 中望3D 2026亮点速递(8)
科技·3d·业界资讯·中望3d·国产三维cad软件·中望3d2026·3d工程图设计