Azide Agarose，叠氮琼脂糖，Agarose-N3特性解析

· 通用名称：Azide Agarose、Agarose-N3、叠氮功能化交联琼脂糖

· 活性官能团：叠氮基团（-N₃），官能团密度 10-60 μmol/mL 沉降湿胶，部分版本带烷基 / PEG 间隔臂，减少空间位阻

· 外观：乳白色半透明凝胶浆液（50% 悬浮浆）

· 储存基准：2-8℃密封避光，保存液多为 20% 乙醇水溶液；严禁冷冻、严禁风干脱水 。

以交联多孔琼脂糖为固相骨架，共价接枝叠氮活性基团，属于生物正交点击化学固相载体，存在两套反应路径：

叠氮与 DBCO、BCN 等环辛炔修饰分子反应，无需铜离子催化，水相中性条件即可进行，生成稳定三唑环共价键；适合蛋白、抗体等生物活性大分子，避免铜离子造成蛋白氧化变性。适宜 pH 6.5-8.0。

针对普通直链炔基修饰底物，需要 Cu⁺作为催化剂；催化体系需做好除氧，铜离子会损伤部分蛋白，反应后要充分洗涤去除铜残留。

注意：叠氮基团本身对氨基、巯基无自发反应，必须依靠炔基配对完成偶联，不会和普通蛋白上赖氨酸、半胱氨酸发生非特异性共价结合。

对比 NHS、马来酰亚胺琼脂糖，叠氮基团在醇类保护液中十分稳定，不会像活性酯一样快速水解；原装条件下可以长期存放，不需要现开现用；仅在与炔基底物相遇时才发生共价偶联，实验时间自由度高。

多孔亲水网络，孔隙通透，大分子可以进入微球内部接触反应位点；非特异性吸附低，背景干扰小；短期耐受 pH 4-10 酸碱环境；可兼容翻转摇床批处理，也可低压装填层析柱使用；粒径 40-160 μm，机械强度适中，低速离心破碎率低。

只识别炔基（DBCO/BCN/ 端炔）修饰底物，不会受样本内普通氨基、巯基干扰；可以实现蛋白、多肽、核酸的位点特异性固定，减少多点随机交联，较大程度保留生物分子空间构象与活性，非常适合互作、质谱富集类实验。

分为短烷基间隔臂、长 PEG 间隔臂版本；长间隔臂可以减少琼脂糖骨架的空间遮挡，提升大分子蛋白、抗体的偶联效率；可根据目标分子分子量选型。

可选择带可断裂连接臂的叠氮琼脂糖，完成捕获之后，通过光刺激或者弱化学处理，把偶联的生物分子从微球上解离洗脱，无需蛋白酶解，适配质谱组学样本前处理工作流。

· CuAAC 铜催化体系会产生氧化损伤，蛋白样本优先选用 DBCO 无铜 SPAAC 路径；

· 叠氮基团不与普通氨基、羧基、巯基直接反应，底物必须提前完成 DBCO / 炔基修饰；

· 水相缓冲中长期浸泡不会快速水解，但不建议水相敞口久放，尽量洗涤平衡后立刻投入点击反应；

· 基质依然严格禁止冷冻、风干，冰晶、失水会直接破坏琼脂糖三维凝胶网络。

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