非洲猪瘟（ASF）是目前威胁全球养猪业最严重的疫病之一。其病原ASFV结构复杂，编码多种功能未知的蛋白。I177L蛋白作为近期被证实的毒力相关因子，成为疫苗与诊断研究的热点。
本研究团队通过原核表达系统，成功构建pDCP-I177L重组质粒，转化至BL21(DE3)感受态细胞。在18℃、0.1 mmol/L IPTG诱导16小时的条件下，重组蛋白以可溶性形式高效表达。经超声裂解、镍柱亲和层析纯化，400 mmol/L咪唑洗脱获得高纯度I177L蛋白，Western blot验证其可被His-tag抗体及ASFV阳性血清识别。
图 1 pDCP-1177L 重组蛋白的表达1
M：蛋白质相对分子质量标准；1：未诱导全菌；2：18 ℃ 16 h 全菌；3：18 ℃ 16 h 裂解上清；4：18 ℃ ；16 h 裂解上清；5：37 ℃ 5 h 全菌；6：37 ℃ 5 h 裂解上清；7：37 ℃ 5 h 裂解上清。
在此基础上，以纯化蛋白免疫BALB/c小鼠，通过细胞融合、HAT筛选、有限稀释法克隆，最终获得9株稳定分泌I177L单抗的杂交瘤细胞株。间接ELISA检测显示，其中6株单抗效价达1:128,000以上。进一步利用Octet®-R2分子互作系统分析，发现2号、9号、7号等单抗与灭活ASFV的亲和力达10⁻⁷ mol/L级别，具备极佳的特异性与结合稳定性。
图2 Octet 检测 pDCP-I177L mAb 与灭活 ASFV 亲和力1
这些单抗不仅可用于I177L蛋白功能研究，还为ASFV基因缺失疫苗与野毒株的鉴别诊断提供了核心原料。尤其在对越南等国已上市的I177L缺失疫苗的监测中，具备重要应用价值。
天津卡梅德生物科技有限公司专注于基因工程蛋白表达、单克隆抗体制备、抗体工程改造及免疫分析试剂开发。公司拥有完善的原核、真核表达平台及高通量抗体筛选技术，可提供从抗原设计、蛋白纯化、动物免疫、杂交瘤筛选到ELISA试剂盒开发的一站式服务。针对非洲猪瘟、口蹄疫、禽流感等动物疫病，卡梅德生物已成功交付多套诊断用抗原抗体对，助力科研机构与生物企业快速推进产品研发。
1刘田雨,邹艳丽,刘珊,等.非洲猪瘟I177L蛋白的表达及单克隆抗体制备J/OL.中国动物传染病学报,1-72026-04-21.https://doi.org/10.19958/j.cnki.cn31-2031/s.20260411.001.