CyQuantiFluor™细胞活力检测试剂盒检测原理详解

一、整体检测机制

CyQuantiFluor™依托双染料协同作用实现活细胞 DNA 特异性定量,为免裂解均相荧光检测体系,全程不依赖细胞生理代谢水平,仅依靠细胞膜完整性区分活 / 死细胞,从源头规避 ATP、胞内酶活波动带来的数据偏差。整套试剂混合后一步加样孵育即可读数,无需洗板、细胞裂解处理。

二、两种染料分工原理

  1. DNA 特异性结合染料 该染料具备细胞膜穿透性,可自由穿过结构完整的活细胞膜,靶向进入细胞核,与基因组 DNA 特异性结合后荧光信号大幅增强,荧光强度和活细胞内 DNA 总量呈线性正比;游离未结合 DNA 的染料仅产生微弱本底荧光,不干扰读数。死细胞细胞膜破损,染料虽可进入,但配套屏蔽染料会消除其荧光。

  2. 背景屏蔽染料无法穿透完整活细胞膜,不会干扰活细胞荧光信号;专一结合死细胞裂解释放的游离 DNA、体系胞外游离 DNA,淬灭该部分 DNA 结合染料产生的杂荧光,彻底屏蔽死细胞、碎片 DNA 造成的背景干扰,最终仪器检出信号只来源于活细胞,保证检测特异性。

三、产品技术优势原理

  1. 无代谢依赖:不检测 ATP、胞内蛋白酶活性,不受药物损伤线粒体、细胞休眠低代谢等因素影响,杜绝假阴 / 假阳性;
  2. 均相一步法:染料预混配置,仅需加样孵育,省去裂解、洗涤步骤,降低人工操作误差;
  3. 高信噪比:双染料双重控背景,空白本底极低,孵育 1~6h 荧光线性稳定,适配 96/384 孔高通量药物筛选。

四、应用逻辑

依托 DNA 定量的精准性,适用于肿瘤细胞增殖定量、候选化合物高通量毒理筛选、药物体外安全性评价、活细胞生长动态监测,是替代传统 CTG、CTF 代谢类试剂盒的优选方案。

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