Step 1｜先把分子看明白
黄芩苷（Baicalin）取自植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）的根部，是该植物主要的黄酮类成分，化学上归属黄酮苷类。要看明白的不是它的来路，而是它的官能团分布：黄酮母核上带有多个酚羟基，糖苷单元上另有羟基，这些基团类型接近、反应活性相似。位点选择的全部难度都来自这里。
Step 2｜列出候选位点并排序
把可以发生反应的基团逐一列出，然后按两条标准排序：反应活性差异与空间可及性。活性差异决定标记能否"挑着接"，空间可及性决定试剂能不能靠近。这一步的参照是成熟案例的处理方式------芍药苷（CAS 23180-57-6）利用糖苷伯羟基较高的反应活性，由生物素-PEG-羧基实现特异性标记，正是把反应活性差异当作抓手的典型做法。
Step 3｜判断修饰会不会影响分子行为
排在候选列表前面的位点，还要再问一句：修饰之后，分子与靶蛋白的识别是否仍能保持。若位点参与识别，标记基团接上之后探针便不再代表母体分子。这一步没有捷径，需要结合分子结构逐一比对。达吉特的化学合成团队具有多年天然产物从头合成经验，可依据分子结构优化反应设计，实现特定位点的定点修饰。
Step 4｜配连接臂与标记基团
位点定了之后才轮到基团。生物素用于亲和富集，炔基与光交联基团用于活细胞环境下的捕获，荧光基团用于定位与成像类需求。连接臂承担把标签推离母体的任务：淫羊藿苷（CAS 489-32-7）先把丁二酸特异性修饰于糖苷伯醇上，再以生物素-PEG-胺基完成标记，PEG链在改善脂溶性与水溶性的同时让生物素远离活性分子；丹参素钠（CAS 67920-52-9）以羧基为位点接入生物素-PEG-胺基，生成的酰胺键结构稳定。达吉特已完成上千种小分子的各类修饰，并常备300余种炔基与光交联基团标记的小分子现货产品。
Step 5｜合成、验证与使用
合成完成后先做验证：核磁共振氢谱核对特征质子的化学位移与耦合关系，质谱确认分子量，必要时结合碳谱；纯度单独检测，修饰产物提高到95%以上。通过验证的探针进入下游：生物素标记探针经Pull-down结合质谱（MS）富集并鉴定候选结合蛋白，也可借助HuProt 20K人类蛋白质组芯片开展高通量鉴定；炔基或光亲和标记探针配合化学蛋白质组学方法，在更接近生理条件的体系中捕获结合蛋白。
五个步骤里，最费时的往往是 Step 2 与 Step 3，而最容易被压缩的也是这两步。对黄芩苷这类官能团数量多、类型相近的黄酮苷，位点排序做扎实，后面的合成与验证会顺很多；反之，问题要到质谱图上才暴露出来，返工成本更高。达吉特的化学合成团队具有多年天然产物从头合成经验，可依据分子结构优化反应设计，实现特定位点的定点修饰，并保证产物的质量与纯度。
（本文由达吉特整理相关文献资料。）
科研说明：以上内容基于化学生物学、合成化学与蛋白质组学相关文献整理，仅用于科研交流。文中涉及的小分子探针及相关试剂仅供科研使用。
