摘要
针对百日咳疫苗质控中功能性指标检测的需求，构建基于 CHO K1 细胞的百日咳毒素（PT）中和抗体检测方法，完成方法学验证与稳定性考察，并验证其在疫苗质控中的应用价值。结果表明，该方法专属性、准确性、精密性良好，能有效检测血清中的中和抗体，与 ELISA 法检测结果具有显著相关性，可为百日咳联合疫苗的研发与质量控制提供高效的体外技术手段。
关键词
CHO 细胞；百日咳毒素；中和抗体；方法学验证；疫苗质控
在无细胞百日咳疫苗的研发与生产质控中，中和抗体是评价疫苗免疫原性与保护性的核心功能性指标，其检测方法的建立与优化是生物制药领域的重要技术需求。传统检测方法存在诸多局限，因此本研究构建一种体外高效检测中和抗体的方法，为疫苗质控提供技术支撑。
本研究选用 ATCC 来源的 CHO K1 细胞系，纯化 PT、PTd 等试剂为自制，实验动物为 SPF 级 NIH 小鼠，制备疫苗免疫血清作为检测样本。方法构建围绕 PT 浓度与 CHO 细胞浓度两个核心参数优化，最终确定 8 ng/mL PT 与 1.0×10⁵个 /mL CHO 细胞为最佳实验条件，在此条件下 PT 能稳定引发细胞簇集，血清稀释梯度可呈现明显的簇集变化。
中和抗体检测的标准化流程为：96 孔板中加入梯度稀释血清与 8 ng/mL PT，37℃中和 3~4 h；加入 CHO 细胞悬液继续培养 44~48 h；镜下观察细胞簇集情况，以少于 50% 细胞簇集的最高血清稀释度为中和效价，实现对中和抗体的定量检测。
方法学验证结果显示，该方法专属性良好，抗 PT 阳性血清 1∶512 稀释后仍具有中和作用，抗 FHA、PRN 血清及阴性对照无中和效应；准确性方面，血清稀释后实际检测效价与理论值偏差≤2 倍；精密性上，日内检测 CV 最大值 6.3%，日间检测 CV 最大值 12.9%，均低于 15% 的可接受阈值。同时，第 10~30 代 CHO 细胞、不同批次 PT 对检测结果的影响在可接受范围内，方法稳定性良好。
将该方法应用于 23 批含 PTd 联合疫苗免疫血清检测，中和抗体效价分布为 16~512，与 ELISA 法检测的抗 PT-IgG 结果 Pearson 相关系数为 0.73，呈显著正相关，验证了方法的实际应用价值。该方法操作简便、检测效率高，能直接检测功能性中和抗体，弥补了传统方法的不足，适合企业实验室开展疫苗研发与质控检测。
综上，本研究建立的 CHO 细胞中和试验能有效检测百日咳毒素中和抗体，方法性能符合疫苗质控要求，可作为百日咳联合疫苗研发、批间一致性监测的重要体外技术手段，为疫苗质量控制提供精准的数据支撑。