在转化医学研究中，犬的地位相当特殊。狗与人共享相同的居住环境，会自发罹患淋巴瘤、骨肉瘤、黑色素瘤等恶性肿瘤，其肿瘤的基因组变异、免疫逃逸特征与人类癌症的相似度远高于啮齿类移植瘤模型【2】。研究者曾从噬菌体文库中筛选出犬PD-L1靶向抗体，并在犬骨肉瘤异种移植模型中评价其抗肿瘤活性【2】。
要获得犬源抗体，构建免疫噬菌体文库是主流路径之一。典型流程是采集免疫犬的外周血或淋巴结B细胞，提取RNA反转录为cDNA，再针对犬IgG可变区设计引物进行扩增。犬抗体的复杂性在于种系基因：其基因组编码11个lambda轻链基因和6个kappa轻链基因，IGHV亚家族超过50种，且部分V基因片段序列尚未完整注释，需要在FR1与FR3之间的"未知序列区"借助5'RACE和简并引物补齐，才能完整覆盖CDR3多样性【1】。研究者用长读长测序验证，构建的犬scFv文库克隆了53种IGHV亚家族，后续还通过FR3-CDR3区二代测序监测淘选过程中CDR3序列的富集情况【1】。
图1. 犬源重链与轻链可变区基因的克隆策略：针对犬染色体8重链位点及17、28号染色体kappa/lambda轻链位点设计cDNA合成与5'RACE扩增引物，覆盖未知序列区并富集约480 bp的可变区片段用于文库构建。
与常规鼠源免疫库相比，犬源库的差异不只是换个动物免疫。鼠源V基因注释完善、商品化引物体系成熟，文库构建相对标准化；而犬源库需针对染色体8的重链位点、染色体17和28的轻链位点分别设计克隆策略，引物简并度更高，验证工作量也更大【1】。此外，犬的免疫系统与人在进化上更接近，其抗体亲和力成熟特征对人类转化研究更具参考价值。
图2. 三种单克隆抗体发现平台的比较：(A) 杂交瘤技术周期长且易丢失稀有克隆；(B) 噬菌体展示高通量淘选但轻重链为人工配对；(C) 单B细胞技术经FACS分选保留天然配对，周期短、效率高。
Phage展示之外，犬单B细胞筛选是另一条互补路线。单B细胞技术通过FACS分选抗原特异性记忆B细胞或浆细胞，经单细胞RT-PCR直接配对天然轻重链可变区，保留体内亲和力成熟的真实配对信息；噬菌体展示则胜在库容量大、可高通量淘选，但轻重链是人工重组配对【3】。实践中常将两种路线并行：文库淘选快速获得候选克隆，单B细胞路线补充天然配对抗体，互为验证。
应用层面，犬源抗体正沿两个方向推进：一是宠物医疗，针对犬淋巴瘤、犬细小病毒等疾病的抗体工具不断涌现；二是转化研究，将犬源抗体犬源化改造、优化Fc功能，可作为新型生物药进入临床前评价的参照体系【4】。自发肿瘤犬的药效数据，能为人类临床试验设计提供跨物种证据。
天津卡梅德生物（KMD Bioscience）围绕犬源抗体发现提供定制化技术服务，涵盖犬源免疫噬菌体文库构建（外周血/淋巴结B细胞采样、IgG可变区扩增与文库质控）、固相与液相淘选、犬单B细胞分选与扩增测序等环节，并可衔接抗体人源化改造、亲和力成熟与功能验证等下游服务。平台已累计交付多物种噬菌体展示项目，可依据客户的抗原类型与应用场景（宠物医疗或转化研究）制定个性化技术方案。具体项目可行性需经技术团队评估后确认。
参考文献
- Lisowska M, Worrall EG, Zavadil-Kokas F, et al. The development of a canine single-chain phage antibody library to isolate recombinant antibodies for use in translational cancer research. Cell Rep Methods. 2025;5(3):101008. PMID: 40132540. PMCID: PMC12049728.
- Song MY, Cho J, Park H, et al. Discovery and functional characterization of canine PD-L1-targeted antibodies for evaluating antitumor efficacy in a canine osteosarcoma xenograft model. Sci Rep. 2025;15(1):7574. PMID: 40038403. PMCID: PMC11880529.
- Shi P, Zhang Z, He W, et al. Leveraging single B cell antibody platforms to develop countermeasures against animal viral diseases: recent advances and future perspectives. Front Vet Sci. 2026;13:1854176. PMID: 42273265. PMCID: PMC13246346.
- Fu Y, Guo Z, Wang H. Therapeutic Monoclonal Antibodies as Advanced Therapies for Companion Animals: Species Adaptation, Fc Biology, Clinical Translation, and Future Platforms. Vet Sci. 2026;13(8):778. PMID: 42655798. PMCID: PMC13517563.