纳米抗体因其独特的单域结构和优异的物理化学稳定性，正成为抗体工程领域的研究热点。本文从技术角度出发，系统梳理了纳米抗体库的三种构建方式（天然、免疫、合成），对比了噬菌体展示、细菌展示、酵母展示和mRNA展示四种筛选技术的优缺点，并重点介绍了CDR突变、丙氨酸扫描等亲和力成熟策略，为抗体工程开发者提供实用参考。
1.传统筛选方法通量低、周期长
在抗体开发中，如何高效获取高亲和力、高特异性的纳米抗体是一大难点。传统方法依赖动物免疫，周期长、成本高，且对弱免疫原性抗原效果差。
图1 纳米抗体的类型1
2.三种文库各有优劣
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天然文库：无需免疫，但需要大量动物血液，库容量需达10^9~10^11。
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免疫文库：亲和力高，但受限于动物个体差异，库容量小（10^6~10^8）。
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合成文库：无需免疫，CDR3区随机突变，库容量中等（10^8~10^9），多样性最强。
3.高效筛选与亲和力成熟策略
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噬菌体展示：操作简便，适应恶劣环境，是主流选择。
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酵母展示：结合FACS分选，筛选精度高，适合真核蛋白。
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mRNA展示：完全体外进行，库容量不受转化效率限制，适合高复杂度文库。
对于亲和力不足的纳米抗体，可采用：
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CDR移植
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定点饱和突变
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计算机辅助设计
4.效率显著提升
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采用mRNA展示技术，仅需5-7轮筛选即可获得高亲和力纳米抗体。
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通过丙氨酸扫描结合定点突变，纳米抗体亲和力可提升10倍以上。
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1董新莹,高晓薇,宋浩,等.纳米抗体的研究进展及其应用现状J.生物工程学报,2024,40(12):4324-4338.DOI:10.13345/j.cjb.240366.