一、背景与适用范围
CHCA（α-氰基-4-羟基肉桂酸，CAS 28166-41-8）由 Beavis、Chaudhary 和 Chait 于 1992 年系统报道作为 MALDI 基质（Beavis RC, Chaudhary T, Chait BT. Org Mass Spectrom 1992, 27:156--158），适合 337/355 nm 氮激光器激发，主要用于分子量 10 kDa 以下的肽段分析，部分分析物可用至 20 kDa。大于 5--10 kDa 的蛋白通常改用芥子酸（SA）基质。CHCA 有吸湿性且对光敏感，应存于琥珀色瓶并置于干燥器中保存。
二、基质溶液的配制（现用现配）
1. 溶剂体系：标准体系为含 0.1% TFA 的 50% 乙腈水溶液（ACN/H₂O = 50:50, v/v，含 0.1% TFA）；溶解困难时可把乙腈比例提高到 70%。Cold Spring Harbor Protocols 给出的配方即为"70% 乙腈 + 0.1% TFA 中配成半饱和 CHCA"。
2. 具体配制（饱和溶液法，推荐）：向 0.5 mL 离心管中加入约 300 μL 上述溶剂，加入过量 CHCA 粉末，涡旋振荡 1--2 分钟，制成饱和溶液（管底留有少量未溶固体）；台式离心机离心约 30 秒沉降未溶物，取上清使用。Harvard 质谱中心给出的替代配方是 4 mg/mL：700 μL 50:50 乙腈/水加 300 μL 丙酮，丙酮用于增加基质溶解度。
3. 固定浓度法：10 mg/mL CHCA 溶于 50% ACN / 47.5% H₂O / 2.5% TFA，涡旋或超声约 5 分钟至完全溶解；也有文献用 5 mg/mL HCCA 溶于 50% ACN / 0.1% TFA，室温涡旋助溶，几分钟内即可完全溶解。
注意：基质溶液应当天新鲜配制，使用前以最高纯度溶剂，必要时对基质重结晶。
三、点样方法
干滴法（ dried-droplet ，最常用）：将肽段样品溶液与基质溶液等体积混合（比例可在 1:1 至 1:10 样品:基质之间调整），取 0.5--1 μL 混合液点于不锈钢靶板，室温下空气中干燥，形成共结晶斑点后即可进样。UCSB 的方案是将样品与基质 1:1 预混后点 1--2 μL，可真空辅助干燥。点样前靶板建议依次用甲醇、水、甲醇清洗并彻底干燥，必要时超声（水/甲醇/丙酮 1:1:1）加金属抛光，避免记忆效应和液滴铺展。
薄层法（thin-layer ，适合低丰度样品提高重现性）：先用丙酮溶解 CHCA 配成约 10 mg/mL，点 0.5--1 μL 于靶孔，数秒内形成薄膜；再另配 ACN/0.2% TFA（50:50）中 10 mg/mL 的 CHCA 工作液，与消化后样品 1:1 混合后点于薄膜上，室温干燥。该法源自 Cadene & Chait（2000）的 ultra-thin layer 方法，文献报道对磺酪氨酸肽段等难分析物可获最佳结果。
四、仪器分析参考条件
以反射模式（reflector，正离子）采集；有文献示例为 50% 激光强度、2000 Hz 采集频率、随机走查模式、100 μm 光栅面积，质量范围 m/z 500--5000。实际激光能量与延迟引出时间需按仪器（如 Bruker、SCIEX 各型号）优化。
五、注意事项
TFA 为强酸，须在通风橱中操作并做好防护；若样品盐浓度高，建议 C18 ZipTip 脱盐后再点样；磺酸化肽段等可加 10 mM 乙酸铵作添加剂以减少基团丢失。
主要参考文献
- Beavis RC, Chaudhary T, Chait BT. α-Cyano-4-hydroxycinnamic acid as a matrix for matrix-assisted laser desorption mass spectrometry. Org Mass Spectrom. 1992;27:156--158. DOI: 10.1002/oms.1210270217（CHCA 作为 MALDI 基质的原始文献）
- Beavis RC, Chait BT, Standing KG. Rapid Commun Mass Spectrom. 1989;3:436--439. DOI: 10.1002/rcm.1290031208
- Cadene M, Chait BT. Anal Chem. 2000;72:5655--5658（薄层法）
- Cold Spring Harb Protoc. 2007; doi:10.1101/pdb.rec10743（CHCA 基质配方）
- Schuster V, et al. 2022（HCCA 5 mg/mL 于 50% ACN/0.1% TFA 方案）